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蜱傳腦炎病毒lgG抗體檢測試劑盒:蜱傳腦炎是一種急性病毒感染,以快速病變?yōu)樘卣?,感染后健康狀態(tài)迅速惡化產(chǎn)生疾病,包括嚴重的關(guān)節痛和發(fā)燒。體溫會(huì )突然上升,可高達40℃,并伴有寒戰。幾天后,發(fā)燒癥狀減弱,繼而復發(fā),這樣周而復始的類(lèi)似鞍狀峰狀曲線(xiàn) 體溫。
更新時(shí)間:2020-06-05
蜱傳腦炎病毒lgG抗體檢測試劑盒
【產(chǎn)品名稱(chēng)】
通用名稱(chēng):蜱傳腦炎病毒lgG檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫法)
英文名稱(chēng):Chikungunya IgG micro-capture ELISA
【產(chǎn)品規格】
96T
【預期用途】
試劑盒可用于人血清和血漿(檸檬酸鹽)中蜱傳腦炎病毒lgG抗體的定性檢測。
【前言簡(jiǎn)介】
蜱傳腦炎病毒是一種屬于披膜病毒科甲病毒屬的節肢動(dòng)物媒介病毒。披膜病毒科甲病毒屬(α-病毒屬)至少有24種不同的種屬。它們是一類(lèi)脂質(zhì)圍繞的病毒體,直徑約為50-60nm。
α-病毒感染初是由感染的蚊子叮咬引起的,感染后,病毒借機進(jìn)入皮下和皮膚組織。1至12天,演變?yōu)?/span>蜱傳腦炎。
蜱傳腦炎是一種急性病毒感染,以快速病變?yōu)樘卣?,感染后健康狀態(tài)迅速惡化產(chǎn)生疾病,包括嚴重的關(guān)節痛和發(fā)燒。
體溫會(huì )突然上升,可高達40℃,并伴有寒戰。幾天后,發(fā)燒癥狀減弱,繼而復發(fā),這樣周而復始的類(lèi)似鞍狀峰狀曲線(xiàn) 體溫。關(guān)節痛主要表現在多關(guān)節,主要累及小關(guān)節區域的嚴重受損,隨運動(dòng)增加,疼痛加劇?;颊咄ǔ苊庖苿?dòng)。關(guān)節會(huì )腫脹,但無(wú)明顯關(guān)節液體積聚。這類(lèi)癥狀持續1周至數月并伴隨有肌痛。病發(fā)一天會(huì )出現皮疹,但也有延遲出現的,然后皮疹漫延至臉部,頸部,演變?yōu)榘哒?、丘疹或紫?,疹間皮膚多為正常 ,伴有瘙癢感,繼而軀干、四肢的伸展側、手掌和足底出現皮疹。也能觀(guān)察到瘀斑皮膚受損。頭痛,畏光,有明顯咽炎,惡心,嘔吐的咽喉痛也是病發(fā)可能出現的癥狀。很多情況下,關(guān)節痛和多發(fā)性關(guān)節炎會(huì )持續數月仍至數年,常伴有關(guān)節受損,更有罕見(jiàn)者,出現包括腦炎,高致命性腦膜腦炎的后遺癥。
這類(lèi)病毒在非洲和亞洲為高發(fā)區。20%至90%熱帶和亞熱區人群發(fā)現有感染的血清學(xué)證據。由于伊蚊在北非和南美急劇橫行,這些地帶的人群對病毒都有易感性,因此造成爆發(fā)疫情的可能性。中歐人群的感染主要是因為一些曾到過(guò)熱帶和亞熱帶的旅行者攜帶蜱傳腦炎病毒而傳染的。
種屬 | 疾病 | 癥狀 | 感染機制 |
蜱傳腦炎病毒 (α-病毒) | 蜱傳腦炎 | 發(fā)燒 皮疹 關(guān)節痛 持續關(guān)節痛和 多發(fā)性關(guān)節炎,有時(shí)有關(guān)節受損 更有罕見(jiàn)者,出現 腦炎和腦膜腦炎 | 由蚊蟲(chóng)叮咬
白紋伊蚊(非洲) 埃及伊蚊(非洲,亞洲) |
病毒感染可由以下方法鑒別
• 血清學(xué): 免疫熒光、酶免法檢測相應的抗體
【檢測原理】
試劑盒采用酶聯(lián)免疫法。微孔中預包被有抗人IgG,用于結合樣品中相應的抗體。洗板后,去除非結合的樣品。再加入蜱傳腦炎抗原液,再次洗板后,再加入生物素化的蜱傳腦炎抗體。加入鏈霉親和素標記結合物(酶聯(lián)物),與固相的特異性的蜱傳腦炎復合物結合。加入TMB底物液后,微孔中顯藍色。顯色的強度與病人樣品中蜱傳腦炎病毒lgG抗體的量成正比。加入終止液終止酶反應,形成黃色終點(diǎn)產(chǎn)物。后在酶標儀處450 nm讀數。
【試劑盒組成成分】
微孔板 12×8
包被有抗人IgG
樣品稀釋液 1×100 mL
即用型、pH7.2±0.2、黃色、白蓋
洗滌液 1×50ml
20倍濃縮、pH7.2±0.2、白蓋
蜱傳腦炎抗原液 6瓶
凍干品、紅蓋
蜱傳腦炎抗體液 1×6ml
含生物素化蜱傳腦炎抗體、即用型、藍色、白蓋
鏈霉親和素酶聯(lián)物 1×6ml
含鏈霉親和素標記的HRP、即用型、紅色、黑蓋
終止液 1×15ml
即用型、含硫酸、濃度0.2mol/L、紅蓋
底物液 1×15ml
即用型、黃蓋
陽(yáng)性質(zhì)控 1×1.5ml
即用型、黃色、紅蓋
臨界質(zhì)控 1×2ml
即用型、黃色、綠蓋
陰性質(zhì)控 1×1.5ml
即用型、黃色、藍蓋
封板紙
支架
所需材料(未提供)
·酶標儀(450/620 nm)
·恒溫箱(37 ℃)
·洗瓶或自動(dòng)洗板機
·移液管(規格10和1000 µL)
·震蕩器
·去離子水或蒸餾水
·一次性試管
·計時(shí)器
【儲存條件】
試劑盒存于2~8℃,能穩定保存至有效期,有效期見(jiàn)標簽 。
【樣品要求】
試驗采用人血清或血漿(檸檬酸鹽)。收集的樣品在2~8℃可保存5天。更長(cháng)時(shí)間,分成小份,凍存于(-20~-70℃)。 凍存樣品,試驗前應*解凍。避免反復凍融。
不建議使用熱滅活樣品
樣品稀釋
試驗前樣品應稀釋?zhuān)?個(gè)單位的樣品+100個(gè)單位的樣品稀釋液,如10µL樣品+1mL樣品稀釋液,在試管中旋渦搖勻。
【檢測方法】
試劑準備
試驗前,將所有試劑,樣品,質(zhì)控品平衡至室溫(20~25℃)
蜱傳腦炎抗原:
每瓶加入1mL稀釋洗滌液溶解,緩慢加入,室溫下靜置溫育15min,制成即用型抗原液。此抗原液在2~8 ℃可穩定保存1天。
洗滌液:
1個(gè)單位的濃縮洗滌液+19個(gè)單位的雙蒸水。
如:10mL濃縮洗滌液+190 mL雙蒸水。稀釋洗滌液在室溫下能穩定保存5天。開(kāi)瓶后,濃縮的洗滌液在2~8℃可穩定保存至有效期.
檢測步驟
試驗前,仔細閱讀說(shuō)明書(shū)。嚴格執行說(shuō)明書(shū)要求才能得到優(yōu)良結果。如試驗使用自動(dòng)洗板機,建議每孔350µL,洗板5次(如手工洗,則每孔300µL,洗板3次)。試驗前,確定好樣品,質(zhì)控品的加樣布局方案。取所需板條置于板架上。
至少設
1孔(如A1) 空白對照
1孔 (如B1) 陰性質(zhì)控
2孔 (如C1+D1) 臨界質(zhì)控
1孔(如E1) 陽(yáng)性質(zhì)控
如覺(jué)得有必要,建議樣品和質(zhì)控品都作雙份檢測。
試驗應按同樣的加樣順序加取試劑,避免不同的時(shí)間間隔造成誤差。
使用新的一次性加樣槍頭,加各質(zhì)控品,樣品
調節恒溫箱為37±1℃
注意:洗滌步驟很關(guān)鍵。不充分的洗板,會(huì )導致不精確或錯誤上升的吸光度值。
藍色溶液在孵育過(guò)程中變?yōu)辄S色。
注意:強陽(yáng)性樣品會(huì )導致色原產(chǎn)生沉淀,沉淀的產(chǎn)生會(huì )對讀數產(chǎn)生影響。所以先用陰性基質(zhì)進(jìn)行預稀釋?zhuān)ㄗh1:1的比例稀釋?zhuān)缓?,?個(gè)單位的預稀釋樣品+100個(gè)單位的樣品稀釋液。終結果(以U計算)乘以預稀釋因子2即可
【結果計算】
用A1空白對照孔對酶標儀進(jìn)行調零
如遇技術(shù)問(wèn)題,酶標儀不能調零。 所測樣品的吸光度值減去空白對照的讀數值,
即可得到較可靠的讀數。
在酶標儀處450 nm處測讀所有質(zhì)控品和樣品的吸光度值。620 nm作為參考波長(cháng)。
如進(jìn)行雙孔檢測,計算吸光度均值。
實(shí)驗有效性標準
如試驗有效,必須滿(mǎn)足以下要求
·空白對照(A1): 吸光度值< 0.100
·陰性質(zhì)控(B1): 吸光度值< 臨界讀數
·臨界質(zhì)控(C1+D1) 吸光度值 0.150~1.300
·陽(yáng)性質(zhì)控(E1) 吸光度值> 臨界讀數
如上述標準沒(méi)滿(mǎn)足,試驗視為無(wú)效,試驗應重測。
結果計算
臨界讀數是雙孔臨界質(zhì)控的吸光度均值
示范: 臨界吸光度值0.39 +臨界吸光度值0.37=0.76 / 2 = 0.38
即吸光度值=0.38
結果分析說(shuō)明
樣品吸光度值高于臨界讀數的10 %視為陽(yáng)性結果。
樣品吸光度值在臨界讀數的±10 %范圍內視為灰色可疑區
建議2-4周后,重新取新鮮的樣品進(jìn)行試驗。如試驗結果仍為灰色可疑區,視
為陰性結果
樣品吸光度值低于臨界讀數的10%視為陰性結果
結果以U表示
病人吸光度均值×10
--――――――― = [Units=U]
臨界指數
示范: 1.216×10
------------- =32 U(Units)
0.38
臨界: 10 U
灰區: 9-11 U
陰性: <9 U
陽(yáng)性: >11 U
【注意事項】
操作注意事項
1. 樣品的不合理處理及實(shí)驗操作的任何改動(dòng)都將影響實(shí)驗的結果。取樣體積、溫育時(shí)間、預處理步驟都必須嚴格按說(shuō)明進(jìn)行。只能使用標準取樣器和標準設備。
2. 一旦實(shí)驗開(kāi)始,所有的步驟都必須完整的進(jìn)行下去,不允許中斷。在使用前,將所有試劑和樣品都平衡至室溫(18-25℃),輕輕搖動(dòng)液體試劑和樣品,試劑混合過(guò)程中要避免氣泡。
3. 避免污染試劑、取樣器、微孔/試管。加試劑和樣本時(shí),請使用新的取樣吸頭。不要交換瓶蓋。蓋好不使用的試劑。不要重復使用微孔/試管或者試劑。
4. 用定標儀對反應板進(jìn)行校準。
5. 溫育時(shí)間會(huì )影響實(shí)驗結果。微孔加樣的順序和時(shí)間都必須*。建議使用8孔微量取樣器給微孔加樣。
6. 微量板的清洗非常重要,微孔清洗不好將會(huì )形成錯誤的實(shí)驗結果。建議使用多孔取樣器或自動(dòng)微孔清洗設備進(jìn)行清洗。每次溫育間隔期間要避免微孔干燥。加洗滌液和吸液時(shí)要避免碰到包被孔。清洗和加試劑時(shí)都應特別小心。清洗時(shí),在微孔中精確的加入洗滌液緩沖液,同時(shí)確保微孔中無(wú)殘渣。
7. 濕度會(huì )影響包被板,所以在未到達室溫時(shí)請勿打開(kāi)包裝,未使用的包被板要重新密封于裝有干燥劑的包裝袋中。
蜱傳腦炎病毒lgG抗體檢測試劑盒