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德國IBL基孔肯雅熱IgG檢測試劑(酶聯(lián)法)可用于人血清和血漿(檸檬酸鹽)中基孔肯雅熱IgG抗體的定性檢測。
更新時(shí)間:2019-04-20
基孔肯雅熱IgG檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫法)
【產(chǎn)品名稱(chēng)】
通用名稱(chēng):基孔肯雅熱IgG檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫法)
英文名稱(chēng):Chikungunya IgG micro-capture ELISA
【產(chǎn)品規格】
96T
【預期用途】
試劑盒可用于人血清和血漿(檸檬酸鹽)中基孔肯雅熱IgG抗體的定性檢測。
【檢測原理】
試劑盒采用酶聯(lián)免疫法。微孔中預包被有抗人IgG,用于結合樣品中相應的抗體。洗板后,去除非結合的樣品。再加入基孔肯雅熱抗原液,再次洗板后,再加入生物素化的基孔肯雅熱抗體。加入鏈霉親和素標記結合物(酶聯(lián)物),與固相的特異性的基孔肯雅熱復合物結合。加入TMB底物液后,微孔中顯藍色。顯色的強度與病人樣品中基孔肯雅熱IgG抗體的量成正比。加入終止液終止酶反應,形成黃色終點(diǎn)產(chǎn)物。后在酶標儀處450 nm讀數。
【檢測方法】
試劑準備
試驗前,將所有試劑,樣品,質(zhì)控品平衡至室溫(20~25℃)
基孔肯雅熱抗原:
每瓶加入1mL稀釋洗滌液溶解,緩慢加入,室溫下靜置溫育15min,制成即用型抗原液。此抗原液在2~8 ℃可穩定保存1天。
洗滌液:
1個(gè)單位的濃縮洗滌液+19個(gè)單位的雙蒸水。
如:10mL濃縮洗滌液+190 mL雙蒸水。稀釋洗滌液在室溫下能穩定保存5天。開(kāi)瓶后,濃縮的洗滌液在2~8℃可穩定保存至有效期.
檢測步驟
試驗前,仔細閱讀說(shuō)明書(shū)。嚴格執行說(shuō)明書(shū)要求才能得到優(yōu)質(zhì)結果。如試驗使用自動(dòng)洗板機,建議每孔350µL,洗板5次(如手工洗,則每孔300µL,洗板3次)。試驗前,確定好樣品,質(zhì)控品的加樣布局方案。取所需板條置于板架上。
至少設
1孔(如A1) 空白對照
1孔 (如B1) 陰性質(zhì)控
2孔 (如C1+D1) 臨界質(zhì)控
1孔(如E1) 陽(yáng)性質(zhì)控
如覺(jué)得有必要,建議樣品和質(zhì)控品都作雙份檢測。
試驗應按同樣的加樣順序加取試劑,避免不同的時(shí)間間隔造成誤差。
使用新的一次性加樣槍頭,加各質(zhì)控品,樣品
調節恒溫箱為37±1℃
注意:洗滌步驟很關(guān)鍵。不充分的洗板,會(huì )導致不精確或錯誤上升的吸光度值。
藍色溶液在孵育過(guò)程中變?yōu)辄S色。
注意:強陽(yáng)性樣品會(huì )導致色原產(chǎn)生沉淀,沉淀的產(chǎn)生會(huì )對讀數產(chǎn)生影響。所以先用陰性基質(zhì)進(jìn)行預稀釋?zhuān)ㄗh1:1的比例稀釋?zhuān)缓?,?個(gè)單位的預稀釋樣品+100個(gè)單位的樣品稀釋液。終結果(以U計算)乘以預稀釋因子2即可
【結果計算】
用A1空白對照孔對酶標儀進(jìn)行調零
如遇技術(shù)問(wèn)題,酶標儀不能調零。 所測樣品的吸光度值減去空白對照的讀數值,
即可得到可靠的讀數。
在酶標儀處450 nm處測讀所有質(zhì)控品和樣品的吸光度值。620 nm作為參考波長(cháng)。
如進(jìn)行雙孔檢測,計算吸光度均值。
實(shí)驗有效性標準
如試驗有效,必須滿(mǎn)足以下要求
·空白對照(A1): 吸光度值< 0.100
·陰性質(zhì)控(B1): 吸光度值< 臨界讀數
·臨界質(zhì)控(C1+D1) 吸光度值 0.150~1.300
·陽(yáng)性質(zhì)控(E1) 吸光度值> 臨界讀數
如上述標準沒(méi)滿(mǎn)足,試驗視為無(wú)效,試驗應重測。
結果計算
臨界讀數是雙孔臨界質(zhì)控的吸光度均值
示范: 臨界吸光度值0.39 +臨界吸光度值0.37=0.76 / 2 = 0.38
即吸光度值=0.38
德國IBL基孔肯雅熱IgG檢測試劑(酶聯(lián)法)